松材线虫即时检测工作流程
松材线虫是全球森林生态系统中最具毁灭性的有害生物之一，由其引起的松树萎蔫病，被称为松树的“癌症”。实现病原的有效、快速、准确检测，可以从根源上控制病害的扩散蔓延，也是松材线虫病防治的首要工作。形态学鉴定方法易造成误判、漏判，难度较大，基于PCR的分子检测技术对仪器设备要求较高，无法满足林业一线和检验检疫部门对病原实时实地的快速、便捷检测的需求。
森环森保所森林病理学科组近期基于重组酶聚合酶扩增技术（RPA），结合胶体金制作的侧流层析试纸条（LFD），开发了一种常温下通过等温扩增方式实现松材线虫即时检测（Point-of-care testing, POCT）的方法流程。该方法通过使用探针、引入碱基错配等方式，克服了来自引物依赖性二聚体产物的假阳性信号干扰，对松材线虫具有高特异性，最低检测限为1 pg（10-3ng）。本研究开发的RPA-LFD检测方法可在不到30分钟的时间内成功检测到松材线虫，是一种快速、灵敏且特异的松材线虫检测方法，结果可视化判读，使用方便，在林间现场具有较大的潜力。
该成果以“消除引物依赖性二聚体产物干扰的基于重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条的松材线虫现场快速检测方法（Rapid On-site Detection of theBursaphelenchus xylophilusUsing Recombinase Polymerase Amplification Combined with Lateral Flow Dipstick that Eliminates Interference from Primer-dependent Artifacts）”为题，发表在Frontiers in Plant Science期刊上。森环森保所2019级硕士生周勤政为第一作者，吕全研究员为通讯作者。该工作得到了浙江省重点研发计划项目和金年会手机版注册登录基本科研业务费专项资金的资助。（周勤政 吕全/森环森保所）
